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一种分离和测定枸橼酸马罗匹坦及其光学异构体的方法与流程
来源: | 作者:川贝生物 | 发布时间: 2022-09-01 | 102 次浏览 | 分享到:

本发明涉及分析化学领域,具体涉及用液相色谱法分离和测定枸橼酸马罗匹坦及其光学异构体的方法。



背景技术:

枸橼酸马罗匹坦(maropitantcitrate),是一种1型神经激肽(nk1)的受体拮抗剂,可通过抑制p物质(引起呕吐的关键性神经递质)而作用于中枢神经系统,也可抑制外周及中枢性呕吐;其化学结构如式(1)所示:

枸橼酸马罗匹坦为手性药物,有两个手性中心,即其有1个对映异构体及2个非对映异构体,共3个光学异构体。该光学异构体作为杂质会影响枸橼酸马罗匹坦原料药及其制剂产品的质量,为了保证药物的安全性,因此在生产过程中需要对其进行严格的质量控制。

目前,含手性碳原子的对映异构体分离一直是手性药物合成和制剂过程中质量控制的难点,且《美国药典》usp、《欧洲药典》ep及《中国药典》ch.p均没有记载枸橼酸马罗匹坦对映异构体及其光学异构体的分析方法,也未检索到有关文献报道枸橼酸马罗匹坦及其光学异构体的分离检测方法。

因此,发明一种分离和测定枸橼酸马罗匹坦及其光学异构体的方法显得尤为重要。



技术实现要素:

术语定义

在下文或下文的内容中,无论是否使用“大约”或“约”等字眼,所有在此公开了的数字均为近似值。每一个数字的数值有可能会出现1%、2%、5%、7%、8%、或10%的差异。

发明详述

为了更准确的控制产品中光学异构体的含量,保证原料药以及制剂产品的质量,本发明人经过反复试验及研究,开发了适合于枸橼酸马罗匹坦及其光学异构体含量测定的分析方法。本发明的方法能简单、快速、准确地分离、检测出枸橼酸马罗匹坦及其光学异构体,其分离度可达3.09-4.63。

本发明的目的在于提供一种用液相色谱法分离测定枸橼酸马罗匹坦及其光学异构体杂质的方法,适用于枸橼酸马罗匹坦药物合成和制剂过程中的质量控制。

一种应用液相色谱法分离测定枸橼酸马罗匹坦及其光学异构体的方法,其特征在于,采用以多糖衍生物为填料的手性色谱柱,以正己烷、异丙醇、甲醇以及二乙胺混合溶液或以正庚烷、异丙醇、甲醇以及二乙胺混合溶液为流动相。

在一些实施例中,所述手性色谱柱的多糖衍生物填料为直链淀粉-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)、纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)、直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)、直链淀粉-三[(s)-α-甲苯基氨基甲酸酯]、纤维素-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)、纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]或其组合,在一些实施例中,多糖衍生物填料为直链淀粉-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)或纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)。

在一些实施例中,所述的手性色谱柱为chiralpakie或chiralpakic,销售厂家是大赛璐药物手性技术(上海)有限公司,英文名daicelchiraltechnologies(china)co.,ltd。

在一些实施例中,所述流动相中正己烷、异丙醇、甲醇与二乙胺的体积比(v/v)为94:4.5:1.5:0.05;或者为95:3.75:1.25:0.05;或者为93:5.25:1.75:0.05。

在一些实施例中,所述流动相中正庚烷、异丙醇、甲醇与二乙胺的体积比(v/v)为94:4.5:1.5:0.05;或者为95:3.75:1.25:0.05;或者为93:5.25:1.75:0.05。

本发明所述的分离测定方法,包含以下步骤:

1)取任意光学纯度的枸橼酸马罗匹坦或含任意光学纯度的枸橼酸马罗匹坦的制剂样品适量,用一定量的正己烷与乙醇的体积比(v/v)为4:1的混合溶液或流动相溶液作为稀释剂溶解样品;

2)设置仪器参数:流动相的流速、检测波长、色谱柱的柱箱温度;

3)取一定量步骤1)的溶液,注入高效液相色谱仪,完成枸橼酸马罗匹坦与其光学异构体的分离测定。

步骤1)所述的枸橼酸马罗匹坦可以是任意光学纯度的,作为检测使用的枸橼酸马罗匹坦可以采用cn1048492c所公开的方法制备。

在一些实施例中,步骤1)所述的流动相溶液为正己烷,异丙醇,甲醇以及二乙胺混合溶液;在一些实施例中,所述的正己烷,异丙醇,甲醇以及二乙胺的体积比(v/v)为94:4.5:1.5:0.05;或者为95:3.75:1.25:0.05;或者为93:5.25:1.75:0.05。

在一些实施例中,步骤1)所述的流动相溶液为正庚烷,异丙醇,甲醇以及二乙胺混合溶液;在一些实施例中,所述的正庚烷,异丙醇,甲醇以及二乙胺的体积比(v/v)为94:4.5:1.5:0.05;或者为95:3.75:1.25:0.05;或者为93:5.25:1.75:0.05。

在一些实施例中,步骤1)所述的稀释剂中每1ml稀释剂含枸橼酸马罗匹坦样品0.5mg至5mg;在另一些实施例中,步骤1)所述的稀释剂中每1ml稀释剂含枸橼酸马罗匹坦样品1mg至3mg;在某些实施例中,步骤1)所述的稀释剂中每1ml稀释剂含枸橼酸马罗匹坦样品2mg;在某些实施例中,步骤1)所述的稀释剂中每1ml稀释剂含枸橼酸马罗匹坦样品5mg。

步骤2)所述流动相的流速为0.3ml/min至2ml/min;在一些实施例中,流动相的流速为0.8至1.1ml/min。所述检测波长为220nm至300nm;在一些实施例中,检测波长为230nm;所述色谱柱柱箱温度为20℃至40℃;在一些实施例中,色谱柱柱箱温度为35℃。

步骤3)所述样品溶液进样量为2μl至20μl;在一些实施例中,所述样品溶液进样量为3μl。

在一些实施例中,本发明所述的分离测定方法,包含以下步骤:

1)取枸橼酸马罗匹坦与其光学体的混合物或枸橼酸马罗匹坦或含枸橼酸马罗匹坦的制剂样品适量,用流动相溶液或正己烷与乙醇的混合溶剂溶解样品,并配制成每1ml含枸橼酸马罗匹坦0.5mg至5mg的样品溶液;

2)设置流动相的流速为0.3ml/min至2ml/min,流动相的流速优选为0.8至1.1ml/min,检测波长为220nm至300nm,检测波长优选为230nm,色谱柱柱箱温度为20℃至40℃,优选35℃;

3)取步骤1)的样品溶液2μl至20μl,优选3μl,注入高效液相色谱仪,完成枸橼酸马罗匹坦及其光学体的分离测定。

其中:

所采用的高效液相色谱仪为美国agilent1260型高效液相色谱系统及工作站,

手性色谱柱选自chiralpakie或chiralpakic。

本发明采用以多糖衍生物为填料的手性色谱柱,以正己烷、异丙醇、甲醇以及二乙胺混合溶液或者以正庚烷、异丙醇、甲醇以及二乙胺混合溶液为流动相,可以将枸橼酸马罗匹坦与其光学异构体进行有效分离,从而可以准确有效控制枸橼酸马罗匹坦的质量。采用本发明所述的分离方法,分离检测枸橼酸马罗匹坦及其光学体的时间在20分钟以内,本发明的方法能简单、快速、准确的分离检测出枸橼酸马罗匹坦及其光学异构体,分离度可达3.09-4.63。

具体实施方式

为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案,下面进一步披露一些非限制实施例对本发明作进一步的详细说明。

本发明所使用的试剂均可以从市场上购得或者可以通过本发明所描述的方法制备而得。

本发明中,mmol表示毫摩尔,h表示小时,g表示克,ml表示毫升。

本发明中使用的仪器与色谱柱的规格为:

美国agilent1260型高效液相色谱系统及工作站;

实施例1-实施例4:以chiralpakie手性色谱柱分离检测枸橼酸马罗匹坦及其光学异构体的方法。

枸橼酸马罗匹坦有两个手性中心,有1个对映异构体及2个非对映异构体,共3个光学异构体。在实施例中,枸橼酸马罗匹坦简称(s,s)-mrpt,其对映异构体简称(r,r)-mrpt,两个非对映异构体分别简称(s,r)-mrpt以及(r,s)-mrpt。

实施例1

条件参数

紫外检测波长:230nm;流动相:正己烷:异丙醇:甲醇溶液:二乙胺(95ml:3.75ml:1.25ml:0.05ml)为流动相;柱温:35℃;进样体积为3μl。

实验步骤

稀释剂:正己烷:乙醇=80ml:20ml;取马罗匹坦与非对映异构体的混合物约20mg,置10ml容量瓶中,用稀释剂稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。

取供试品溶液,按上述条件进行高效液相色谱分析,记录色谱图,结果见图1。分别采用(s,s)-mrpt,(r,r)-mrpt,(s,r)-mrpt以及(r,s)-mrpt对照品对色谱峰进行定位,图1中保留时间为9.69分钟的色谱峰为(s,s)-mrpt的色谱峰;8.63分钟的色谱峰为马罗匹坦的对映异构体(r,r)-mrpt的色谱峰;11.34分钟,12.99分钟的色谱峰分别为马罗匹坦的非对映异构体(s,r)-mrpt以及(r,s)-mrpt的色谱峰。

实施例2

条件参数

紫外检测波长:230nm;流动相:正己烷:异丙醇:甲醇溶液:二乙胺(94ml:4.5ml:1.5ml:0.05ml)为流动相;柱温:35℃;进样体积为3μl。

实验步骤

稀释剂:正己烷:乙醇=80ml:20ml;取马罗匹坦与非对映异构体的混合物约20mg,置10ml容量瓶中,用稀释剂稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。

取供试品溶液,按上述条件进行高效液相色谱分析,记录色谱图,结果见图2。图2中保留时间为8.47分钟的色谱峰为(s,s)-mrpt的色谱峰;7.66分钟的色谱峰为马罗匹坦的对映异构体(r,r)-mrpt的色谱峰;9.70分钟,10.99分钟的色谱峰分别问马罗匹坦的非对映异构体(s,r)-mrpt以及(r,s)-mrpt的色谱峰。

实施例3

条件参数

紫外检测波长:230nm;流动相:正己烷:异丙醇:甲醇溶液:二乙胺(93ml:5.25ml:1.75ml:0.05ml)为流动相;柱温:35℃;进样体积为3μl。

实验步骤

稀释剂:正己烷:乙醇=80ml:20ml;取马罗匹坦与非对映异构体的混合物约20mg,置10ml容量瓶中,用稀释剂稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。

取供试品溶液,按上述条件进行高效液相色谱分析,记录色谱图,结果见图3。图3中保留时间为8.21分钟的色谱峰为(s,s)-mrpt的色谱峰;7.46分钟的色谱柱为马罗匹坦的对映异构体(r,r)-mrpt的色谱峰;9.28分钟,10.43分钟的色谱峰分别问马罗匹坦的非对映异构体(s,r)-mrpt以及(r,s)-mrpt的色谱峰。

实施例4

条件参数

紫外检测波长:230nm;流动相:正己烷:异丙醇:甲醇溶液:二乙胺(94ml:4.5ml:1.5ml:0.05ml)为流动相;柱温:35℃;进样体积为2μl。含枸橼酸马罗匹坦的制剂样品如枸橼酸马罗匹坦普通片从zoetis购买。

实验步骤

稀释剂:甲醇;取枸橼酸马罗匹坦参比制剂0.5ml,置2ml容量瓶中,用稀释剂稀释至刻度,配制成5mg/ml溶液,摇匀,作为供试品溶液。

取供试品溶液,按上述条件进行高效液相色谱分析,记录色谱图,结果见图4,图5。图4为空白溶液谱图,图5中保留时间为7.39分钟的色谱峰为(s,s)-mrpt的色谱峰;9.93分钟的色谱峰分别为枸橼酸马罗匹坦的非对映异构体(r,s)-mrpt的色谱峰。

本发明的方法已经通过较佳实施例进行了描述,相关人员明显能在本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。本领域技术人员可以借鉴本文内容,适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的,它们都被视为包括在本发明内。